Traducción hecha en la Universidad de Alcalá de Henares, España

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Problemas sobre tecnología del DNA recombinado

Tutoría para el problema 3: técnica de Southern

La técnica de Southern implica:
la detección de fragmentos de DNA sobre una membrana mediante una sonda de DNA radiactivo.

Tutoría

Separación de DNA mediante electroforesis en gel

Se toma DNA de dos individuos A y B

Se digiere con una endonucleasa de restricción

Los fragmentos se aplican sobre un gel de agarosa para su electroforesis

El DNA tiene carga negativa, y en un campo eléctrico migra hacia el electrodo positivo.

La velocidad de migración a través del gel es inversamente proporcional al tamaño del fragmento.

Transferencia de los fragmentos de DNA a hojas de nitrocelulosa

Los fragmentos de DNA se transfieren a hojas de nitrocelulosa, a las que se adhieren.
Los fragmentos de DNA se desnaturalizan y se separan por electroforesis en gel

Los fragmentos se pasan a la hoja de nitrocelulosa y se fijan con calor 

La membrana se somete a una sonda radiactiva de RNA o DNA que se une a los fragmentos complementarios de DNA

Se usa la autorradiografía para detectar los fragmentos radiactivos.

Fijación de los fragmentos de DNA

Los fragmentos desnaturalizados de DNA se fijan por calentamiento.

Se añade una sonda radiactiva, que puede hibridar con una secuencia génica del DNA.

La hoja se lava y se pone en contacto con una película sensible a rayos X para conseguir la autorradiografía.

Problema 3 | Respuesta | Problema 4

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El Proyecto Biológico
University of Arizona
Department of Biochemistry and Molecular Biophysics
November 1996
Traducido: junio 2005
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